|
|
Analýza koronavirů metodou QRT-PCR a možnosti terapie pomocí nanoliposomálních nosičů rekombinantních antigenů
Krchová, Lenka ; doc. RNDr. Milan Bartoš. Ph.D. (oponent) ; Turánek, Jaroslav (vedoucí práce)
Tato diplomová práce se zabývá studiem koronavirů, jejich diagnostikou a následně možnou konstrukcí rekombinantní vakcíny na bázi liposmálních nosičů rekombinantních antigenů. Experimentální část diplomové práce se dotýká dvou rovin. Nejdřív byla měřena a zkoumána diagnostika viru SARS-CoV-2 metodu real-time PCR. Bylo pracováno s biologickým materiálem velkého počtu pacientů. Společně se základním stanovením přítomnosti viru bylo zkoumáno, jak je virová částice stabilní v čase, jak odolává teplotním změnám, jaký vliv má naředění nosného media na hodnotu Ct a další dílčí experimenty. Ze všech metadat je v závěru vyhodnocena nejpřínosnější varianta pro diagnostiku patogenu. Experimentální část následně navazuje na možnou terapii pomocí rekombinantních vakcín. Tato problematika je velmi aktuální a hýbe celou odbornou veřejností. Byly připraveny liposomy, které v rekombinantních vakcínách slouží jako nosiče bioaktivních látek. Liposomy byly homogenizovány extruzí na požadovanou velikost a různě povrchově modifikovány. Bylo zkoumáno navázání antigenu, stálost v čase a případná degradace. Liposomy byl charakterizovány pomocí DLS, nanoflow cytometrie a elektronové mikroskopie.
|
|
|
Ověření praktických možností posílení imunitního systému u mužů
BOHÁČOVÁ, Kateřina
Tato diplomová práce je zaměřena na imunitní systém, jeho funkci a činitele jež jej ovlivňují. V teoretické části se zaměřuje na vymezení pojmu a fungováním imunitního systému. V první řadě je přiblížení biologického hlediska, včetně popisu jeho základních buněk, primárních orgánů a rozdělení. Dále se práce zabývá důležitými činiteli, které mají zásadní vliv na jeho činnost. Tyto činitele dělím na pozitivně ovlivňující a negativně ovlivňující, kde se v každé kapitole zmiňuje dopady na lidské zdraví v případě jejich nadbytku a nedostatku. Praktická část je zaměřena na uskutečnění znalostí v praxi, konkrétně prostřednictvím imunitního tréninku sestaveného doktorem Hermannem Geesingem. Imunitní trénink je prováděn osmi muži po dobu pěti měsíců. Výsledky jejich snažení v tréninku si subjektivně hodnotí sami účastníci dle předem stanovených otázek. Závěrem je výstup, který je představen pomocí tabulek a grafů. Součástí je i rozhovor. Hodnocení zahrnuje psychický a fyzický stav účastníků na začátku a v závěru imunitního tréninku, současně s popisem aktivit, které byly pro účastníky snadno nebo obtížně splnitelné.
|
|
|
Zavedení a optimalizace metody ELISA
KOPAČKOVÁ, Tereza
Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay neboli ELISA je metoda mající široké uplatnění zejména v imunologii. Metodou lze prokazovat antigeny i protilátky. Základním principem metody je reakce antigenu a protilátky a následné vytvoření imunokomplexu. Imunokomplex je detekován konjugátem, který způsobí barevnou změnu substrátu v případě přítomnosti antigenu nebo protilátky ve vyšetřovaném vzorku. ELISA test představuje jednoduchou metodu významnou pro diagnostiku různých onemocnění nebo laboratorní výzkum. Tato metoda je speciálním typem enzymové imunoanalýzy. Bakalářská práce je zaměřena na obecné zavedení a optimalizaci ELISA metody. Cílem teoretické části práce je obecné seznámení s imunologickými metodami. Podrobně je vypracováno rozdělení jednotlivých druhů ELISA testů včetně principů a využití v praxi. V praktické části je zavedena a optimalizována metoda ELISA s využitím fotometru DYNAREAD pro odečítání 96jamkových mikrotitračních destiček a softwaru AlaDYN. Tímto způsobem je vyšetřeno celkem 8 zkušebních vzorků sér a následně zpracována získaná data. Zkušební měření bylo provedeno pomocí testovací sady QuantiVac ELISA a stanovovány byly lidské protilátky třídy IgG proti SARS-CoV-2 v séru. Jako antigeny byly použity domény spikových proteinů SARS-CoV-2 exprimované rekombinantně v lidské buněčné linii HEK 293. Měření proběhlo pomocí přístroje DYNAREAD a zpracování dat pomocí softwarové aplikace AlaDYN. Měřeno bylo 6 kalibrátorů, pozitivní kontrola, negativní kontrola a poté jednotlivé vzorky sér. Výsledkem měření je 5 vzorků sér, ve kterých byly detekovány protilátky anti-SARS-CoV-2 třídy IgG a 3 vzorky, u nichž se protilátky neprokázaly.
|
|
|
Metoda imunohistochemie v patologii
HRDINOVÁ, Andrea
Bakalářská práce pojednává o využití imunohistochemických metod v diagnostice novotvarů v patologii. Popisuje využití spektra protilátek na oddělení patologie Nemocnice Český Krumlov, a.s. Imunohistochemické metody jsou dnes významnou metodou používanou v patologii pro typizaci nádorů a v případě metastáz pro určení primárních nádorů. Doplňují standardní barvící metody pro základní diagnostiku, jako např. Hematoxylin-Eosin a Van-Gieson, u kterých je nižší specifičnost. Tyto metody slouží zejména k barevnému odlišení základních buněčných složek a tkáňových komponent preparátu. Metody imunohistochemie jsou založené na principu afinity speciální protilátky vůči danému antigenu a jsou rozděleny na přímé a nepřímé metody. U přímé metody se pro detekci antigenu použije protilátka značená např. enzymem, který po navázání vyvolává barevnou změnu, kterou pozorujeme pod mikroskopem. Nepřímá metoda (dvoustupňová i třístupňová) je metoda mnohem citlivější, je založena na principu neznačené primární protilátky, na kterou se naváže konjugovaná sekundární protilátka s enzymem nebo biotinem. U třístupňové metody pak využíváme afinity avidinu a biotinu, kdy se vytvoří komplex avidin-biotin-enzym (např. peroxidáza), který se znázorní a zvýrazní. Podrobněji se bakalářská práce zabývá diagnostikou nádorů prsu a sentinelové lymfatické uzliny, jak v teoretické, tak v praktické části a dále incidencí těchto nádorů od zavedení imunohistochemické metody na oddělení patologie Nemocnice Český Krumlov, a.s. V neposlední řadě je zde popsána i kazuistika jednotlivých zajímavých případů.
|
|
|
Preparation of antibodies to determine the association of mitoribosomal complexes with mitochondrial membrane
ZELLNER, Laura
The assembly pathways of mitoribosomes, descendants of bacterial ancestors producing proteins encoded by vestigial mitochondrial genomes, remains largely unknown. To shed light on structural features of a precursor of the highly divergent small mitoribosomal subunits (mtSSU) from Trypanosoma brucei, called mtSSU assemblosome, recently characterized by cryoEM, we raised antibodies against two assembly factors present in the complex and against two subunits of the mature mtSSU. We used the antibodies in pilot experiments to determine whether the assemblosome associates with the inner mitochondrial membrane.
|
|
|
Studium slepičích protilátek proti S proteinu viru SARS-CoV-2
Křížová, Tereza ; Hodek, Petr (vedoucí práce) ; Svášková, Dagmar (oponent)
Začátkem roku 2020 světová zdravotnická organizace WHO vyhlásila pandemii v souvislosti šíření nové nákazy. Nemoc Covid-19 se projevuje především respiračními problémy způsobenými virem SARS-CoV-2. Do hostitelské buňky vstupuje přes receptor ACE2, na který se váže RBD doménou povrchového "spike" proteinu. Možným způsobem, jak se před virovou infekcí bránit, je očkování např. mRNA vakcínou, čímž je navozena produkce "spike" proteinu k vyvolání imunitní odpovědi a produkci protilátek. Další možnou alternativou ochrany je pasivní imunoterapie. V této práci byly zvoleny protilátky ze slepičích vajec, které mají široké využití v prevenci různých virových a bakteriálních onemocnění. Vyznačují se velkou vazebnou afinitou k antigenům, jsou ekonomicky nenáročné a jsou považovány za rychlý, jednoduchý a bezpečný způsob pasivní ochrany. Z vaječných žloutků slepic vakcinovaných mRNA vakcínou kódující "spike" protein byly připraveny protilátky IgY. Pomocí ELISA byla testována reaktivita připravených protilátek s celým "spike" proteinem (exprimovaný v hmyzích buňkách), kde byla prokázána schopnost protilátek se vázat na antigen s vysokou afinitou. Následně byla ověřována jejich schopnost interakce se samotnou RBD doménou (exprimovaná v E. coli). Technikou ELISA byla prokázána jen malá reaktivita protilátek...
|
|
|
Analýza koronavirů metodou QRT-PCR a možnosti terapie pomocí nanoliposomálních nosičů rekombinantních antigenů
Krchová, Lenka ; doc. RNDr. Milan Bartoš. Ph.D. (oponent) ; Turánek, Jaroslav (vedoucí práce)
Tato diplomová práce se zabývá studiem koronavirů, jejich diagnostikou a následně možnou konstrukcí rekombinantní vakcíny na bázi liposmálních nosičů rekombinantních antigenů. Experimentální část diplomové práce se dotýká dvou rovin. Nejdřív byla měřena a zkoumána diagnostika viru SARS-CoV-2 metodu real-time PCR. Bylo pracováno s biologickým materiálem velkého počtu pacientů. Společně se základním stanovením přítomnosti viru bylo zkoumáno, jak je virová částice stabilní v čase, jak odolává teplotním změnám, jaký vliv má naředění nosného media na hodnotu Ct a další dílčí experimenty. Ze všech metadat je v závěru vyhodnocena nejpřínosnější varianta pro diagnostiku patogenu. Experimentální část následně navazuje na možnou terapii pomocí rekombinantních vakcín. Tato problematika je velmi aktuální a hýbe celou odbornou veřejností. Byly připraveny liposomy, které v rekombinantních vakcínách slouží jako nosiče bioaktivních látek. Liposomy byly homogenizovány extruzí na požadovanou velikost a různě povrchově modifikovány. Bylo zkoumáno navázání antigenu, stálost v čase a případná degradace. Liposomy byl charakterizovány pomocí DLS, nanoflow cytometrie a elektronové mikroskopie.
|
|
|
Diagnostika a management aloimunizace v těhotenství
Kučerová, Rebecca ; Hornová, Markéta (vedoucí práce) ; Žižka, Zdeněk (oponent)
Tato bakalářská práce je zaměřena na problematiku aloimunizace matky v těhotenství a zabývá se její prevencí, diagnostikou a managementem. V České republice by se tato komplikace bez zahájení patřičné léčby vyskytla přibližně u 2000 žen ročně. Těhotná je ohrožena v případě, že je Rh(D) negativní a plod zdědí Rh(D) pozitivitu po otci. Rozvoji aloimunizace lze zabránit včasným preventivním podáním anti-D globulinu. I přes systematicky organizovaný systém profylaxe dochází dnes stále u malého počtu těhotných k imunizaci. Plody jsou ohroženy rozvojem anémie v děloze a po porodu potom rozvojem hyperbilirubinémie. U nejtěžších případů intrauterinní anemizace plodu je řešením intraumbilikální transfuze erytrocytů. Cílem práce bylo retrospektivně posoudit výsledky léčby pomocí intraumbilikální transfuze v Centru fetální medicíny. Kvantitativní část výzkumu je doplněna o 2 modelové kazuistiky hydropsu plodů. Kvantitativní část výzkumu analyzuje výsledky všech IUT provedených v od roku 1991 do roku 2021 v Centru fetální medicíny gynekologicko-porodnické kliniky VFN a 1. LF UK v Praze. Pomocí tabulek a grafů byly následně data analyzována a podrobně popsaná. Z výzkumné části této práce vyplynulo, že léčba plodů pomocí IUT je velmi úspěšná a zvyšuje šanci plodů na příznivou poporodní adaptaci. Z výsledků této...
|
|
|
The Role of Lck Kinase in T-cell Antigen Receptor Signaling
Němec, Dušan ; Štěpánek, Ondřej (vedoucí práce) ; Rösel, Daniel (oponent)
Aktivita LCK kinázy je nezbytně nutná pro zahájení procesu aktivace T lymfocytu. Primární funkcí LCK je převod informace o vazbě pMHC glykoproteinů na TCR do vnitřního prostředí buňky. Výsledkem kaskády, jež aktivní LCK spouští, je aktivace T buňky, produkce cytokinů, diferenciace a klonální expanze. Tato práce poskytuje souhrn současných znalostí o LCK kináze a její nenahraditelné roli v TCR signalizaci a stejně tak přehled nejvýznamnějších regulátorů a interakčních molekul. Dále pak popisuje význam interakce LCK s koreceptory pro optimální TCR signalizaci a fyziologický vývoj thymocytů a též zmiňuje diskutovanou roli LCK jako adaptorového proteinu T buněk. Klíčová slova: LCK, T lymfocyt, antigen, kináza, enzym
|
|
|
Characterization of T-cell clones from naïve and virtual memory compartment
Přibíková, Michaela ; Štěpánek, Ondřej (vedoucí práce) ; Drbal, Karel (oponent)
Virtuálně paměťové (VM) CD8+ T buňky představují populaci tzv. antigeně-nezkušených T buněk, které mají centrálně paměťový fenotyp. Tvoří 10-20% všech periferních CD8+ T buněk v neimunizované bezmikrobní myši. Formují se z vysoce autoreaktivních T buněčných klonů na periferii prostřednictvím silných homeostatických signálů T-buněčného receptoru (TCR). V první části této diplomové práce bylo cílem porovnat TCR repertoáry VM a naivních CD8+ T buněk. Ukázali jsme, že obě skupiny buněk mají tyto repertoáry odlišné a T-buněčné podmnožiny navíc obsahují odlišné klonotypy. Dále jsme zjistili, že tzv. VM klony byly přítomny jak ve VM buňkách, tak i v naivních buňkách. Na druhou stranu tzv. naivní klony se vyskytovaly pouze v buňkách naivních. V druhé části této práce bylo cílem charakterizovat signalizaci jednotlivých OVA-reaktivních TCR z VM a naivní podmnožiny T buněk. Úspěšně jsme dokázali, že šest z osmi testovaných TCR odpovídají na Kb-OVA. V poslední části práce jsme navrhli a optimalizovali qPCR metodu, která je určena pro relativní kvantifikaci specifických T- buněčných klonotypů před a během imunitní odpovědi. Tato metoda bude sloužit jako efektivní nástroj pro studování biologie jednotlivých VM a naivních podmnožin T buněk a jejich role během imunitní odpovědi. Klíčová slova: T-buněčný receptor,...
|
host ::
RSS.